Самурай Джек

Главный герой мультфильма. Юный самурай обучался стилям борьбы всего мира, и у него получится победить Аку. Но только цена победы дорога: прежде чем вернуться в прошлое, ему придётся исправить будущее. Самурая прозвали Джеком уже во второй серии мультсериала, как бы хотели выделить его среди остальных. Он владеет волшебным мечом, которым дорожит, ведь это единственное, что у него осталось в будущем. Сначала в будущем он признан шпаной, но потом становится авторитетом и возглавит войска против злого Аку. Несмотря на его внешность, созданную «угловатой» анимацией, Джек сам по себе обаятелен, добр, а немые эпизоды с ним — безупречны. Иногда слова ему не нужны. Озвучка — Фил ЛаМарр (на русский - Никита Прозоровский).

Аку

Злодей в мультфильме. И, пожалуй, самый главный злодей. Он поработил мир в то время, когда Джек исчез Это злой колдун, а, точнее, демон, которого заточил отец самурая Джека. Но у Аку есть одно преимущество: он умеет перевоплощаться в разных животных. Также Аку интересен зрителю ещё и тем, что он, в отличие от некоторых злодеев, умнеет с годами. Если в прошлый раз его победили волшебным мечом, то второй раз он не допустит этого. Его хитрость отражается в отправлении Джека в будущее, чтобы тот не убил его. Ум и хитрость — вот что отличает Аку от других злодеев в мультфильмах. В мультфильме Аку озвучивает Мако.

Шотландец

Номер два во Вселенной мультфильма среди разыскиваемых силами зла противников Аку. Друг Самурая Джека, наделенный необоримым желанием доказать свое превосходство над ним в разных умениях. Перекликается с рядом персонажей «Храброго Сердца». Отличается обильным оволосением груди, взрывным характером, любовью к особому «ароматному» сыру и обожанием, граничащим с подобострастием, в отношении своей супруги. В мультфильме озвучен Джоном ДиМаджио.

Демонго

Демон находящийся в подчинении Аку. Его сила заключена в порабощённых сущностях великих воинов.

Безумный Джек

Подлый злодей,как бы говорит как Аку.

Император

Отец самурая Джека. Его жизнь делится на три промежутка: первый — когда он молод, и когда он победил Аку; второй — когда у него появился сын Джек, и когда Аку снова нападает на него; и третий — когда Аку правит миром, а он смиренно подчиняется Аку, дабы дождаться Джека. Он дождался. Но, к сожалению, всё вышло не так, как он хотел. В мультфильме его озвучивает Клайд Кусацу.

Псы-археологи

Согласно замыслу мульта, собаки с течением времени эволюционировали, находясь рядом с человеком и в будущем представляют собой наделенных недюжим интеллектом особей, порой отличающихся таким почтением и интересом к человеческой культуре, каким не смогли бы похвастать сами люди.

Трицеракуины

земноводные (09. Джек под водой - первый сезон). Раса изначально живущая на поверхности воды, но позже опущенная на дно злобным Аку. Аку вновь пообещал их поднять, если они поймают Джека. Они ведутся на эту утку и пытаются поймать Джека. В целом мирная раса, но доверчивая. В итоге признают свою ошибку, и помогают Джеку побороть Аку, вернув таким образом свой дом обратно на поверхность.

Х-49

Первоначальная серия роботов убийц в "ганста" стиле (11 (50). Рассказ X9 - четвёртый сезон). Одному из которых был вживлён чип эмоций. Вся партия кроме этого одного была уничтожена в бою, и заменена на роботов жуков.